在AJAX应用中，Response.Flush方法用于立即发送缓冲区的内容到客户端，而不是等到整个响应完成后再发送。然而，有几种情况下Response.Flush可能失效：
缓冲区大小：如果缓冲区的大小没有达到Response.Flush方法的调用阈值，则Response.Flush将不会立即发送内容。默认情况下，缓冲区的大小是4KB，可以通过修改Response.BufferSize属性来调整缓冲区的大小。
响应头信息：如果在调用Response.Flush方法之前发送了响应头信息（例如设置了Content-Type或Content-Disposition头），则Response.Flush将不会立即发送内容。这是因为响应头信息必须在响应正文之前发送。
服务器压缩：如果启用了服务器压缩（例如Gzip压缩），则Response.Flush可能会失效。压缩是在整个响应完成后才进行的，因此即使调用了Response.Flush，内容仍然会在压缩之后才发送到客户端。
客户端请求：如果客户端在接收到部分响应之前关闭了连接，那么Response.Flush将不会发送剩余的内容。这种情况下，即使调用了Response.Flush，剩余的内容也不会被发送到客户端。
综上所述，Response.Flush可能失效的原因包括缓冲区大小、响应头信息、服务器压缩和客户端请求。要确保Response.Flush能够正常工作，可以适当调整缓冲区大小、在发送响应头信息之前调用Response.Flush、禁用服务器压缩或处理客户端请求的情况。